一、操作流程
外植体接种→外植体生长与分化→试管苗继代增殖培养→试管苗复壮→试管苗生根→炼苗→试管苗移栽
二、选材及灭菌
1.外植体
观赏盆花组培快繁过程中根据不同植物选取的外植体不同，具体外植体选择如下。
一品红：带腋芽茎段、叶心。
丽格海棠：带腋芽的茎段。
大花蕙兰：假鳞茎上新生侧芽。
2.外植体消毒
不同植物根据其器官消毒试剂和消毒方法不同，具体如下。
一品红：从植株上切下叶心部分、带腋芽的茎段在自来水冲0.5h洗去灰尘和表面微生物，再用洗衣粉液刷洗，流水漂洗1h～2h，沥干后置于干净的烧杯中备用。在无菌工作台上，将预处理过的外植体用75%酒精振荡消毒30s～60s→取出后用无菌水冲洗3次～4次→放入0.1%氯化汞溶液溶液中消毒7min～8min→用无菌水冲洗5次～6次，在超净工作台上，将顶芽和带节的嫩茎段切成1.5cm～2.0cm长→待接种。
丽格海棠：将剪好的外植体用自来水洗去灰尘和表面微生物，再用洗衣粉液轻洗表面，流水漂洗30min左右，沥干后置于干净的烧杯中备用。在无菌工作台上，将处理过的外植体用70%酒精振荡消毒30s～50s→取出后用无菌水冲洗3次～4次→放入0.1%氯化汞溶液溶液中消毒5min～7min→用无菌水冲洗5次～6次→待接种。
三、培养条件
1.外植体接种培养基
一品红：MS+IAA1.0mg/L+6-BA0.1mg/L
丽格海棠：MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.1mg/L
将消毒后的外植体接种于外植体培养基上，加瓶盖，放入培养室培养。在25℃左右，每天光照10h、光强160μmol·m-2·s-1的培养条件下（芽转绿后根据需要进行补光），诱导腋芽萌生。接种1周后，芽逐渐膨大，待分化培养。
2.分化培养基及培养条件
一品红：Ms+IAA1.0mg/L+6-BA0.2mg/L
丽格海棠：MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.1mg/L
培养周期：20d～25d
培养条件：温度24℃～26℃，120μmol·m-2·s-1～160μmol·m-2·s-1光照条件下，光照时间10h/d～14h/d。培养基pH值均调至5.8，蔗糖3%，琼脂0.6%。培养约1个月。将营养芽转培到增殖培养基使芽增殖。继代的时间不能太长，应为3周，继代时可剪去叶片上部将基部插入培养基中。
3.生根培养及培养基
生根苗标准：株高2cm～3cm，具有3片～4片完全展开叶，叶色浓绿。
培养条件：温度24℃～26℃，120μmol·m-2·s-1光照条件下，光照时间10h/d～12h/d。
其生根培养基分别如下：
一品红：1/2MS+IAA0.1mg/L+IBA0.1mg/L
丽格海棠：1/2MS+IBA0.6mg/L
生根苗标准：株高2cm～3cm，具有3片～4片完全展开叶，叶色浓绿。
将分株或小丛接种在生根培养基中诱导生根。培养介质pH值为5.8，需要透气好的培养瓶，谨防玻璃苗或畸形苗的出现，通过改善培养条件来调节。
4.试管苗的炼苗和移栽
试管苗70%生根，株高3.0cm～4.0cm，根长0.1cm～0.5cm，茎粗1.5mm～1.8mm，具有4片～5片完全展开叶，叶色绿即进行炼苗。炼苗时间7d～10d，环境要求温度为20℃～28℃，湿度50%～60%，光照强度240μmol·m-2·s-1～400μmol·m-2·s-1。
将合格的试管生根苗置温室炼苗1周，注意遮阳，做好基质配比及基质消毒工作。在试管苗移栽车间内，采用全光照自动喷雾设施控制湿度。试管苗移栽培育周期35d～40d。
一品红基质种类配比：草炭∶珍珠岩∶蛭石为3∶1∶1。
丽格海棠基质种类配比：草炭∶珍珠岩∶蛭石为2∶2∶1。
基质消毒处理：杀菌剂500倍～700倍浓度。
移栽方法：将试管苗从瓶中取出，清洗掉培养基等物，栽植在穴盘基质中，栽植深度1cm并与基质紧密结合。随即喷施杀菌剂，光照强度560μmol·m-2·s-1以下。栽植完毕，喷水，使植株与基质结合紧密，随即喷施杀菌剂，保持湿度80%～85%，10d～15d后生根开始炼苗。
【思考题】
1.木本花卉等植物组织培养操作流程是什么？
2.列举本实验中不同木本花卉的外植体取材部位。
3.分化及生根培养的环控条件是什么？
4.试管苗进行室外驯化的标准是什么？
5.描述试管苗移栽管护方法。
