一、目的要求
1.掌握玻璃器皿等器材的清洗、烘干、包扎技术。
2.为下一次的课做好器材的准备工作。
二、技能目标
1.学会玻璃器皿的清洗、烘干和包扎。
2.能认识各种玻璃器皿并知道其用途。
三、基本原理
为确保微生物实验顺利地进行，要求把实验所用的玻璃器皿清洗干净。为保持灭菌后的无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行包扎，对试管和三角瓶等加棉塞。这些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不按操作规定去做，则会影响实验结果，甚至会导致实验的失败。
四、试剂和器材
试管、三角瓶、培养皿、吸管、棉线、纱布、棉花、牛皮纸、报纸、硅胶塞等。
五、操作步骤
（一）玻璃器皿的洗涤
1.新购玻璃器皿的洗涤
将器皿放入2％盐酸溶液中浸泡数小时，以除去游离的碱性物质，最后用流水冲净。
对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上晾干，即可使用。
2.常用旧玻璃器皿的洗涤
确实无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用前后，可按常规用洗衣粉水进行刷洗。
吸取过化学试剂的吸管，先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。
3.带菌玻璃器皿的洗涤
凡实验室用过的菌种以及带有活菌的各种玻璃器皿，必须经过高温灭菌或消毒后才能进行刷洗。
（1）带菌培养皿、试管、三角瓶等物品，做完实验后放入消毒桶内，用0.1MPa灭菌20～30min后再刷洗。含菌培养皿的灭菌，底盖要分开放入不同的桶中，再进行高压灭菌。
（2）带菌的吸管、滴管，使用后不得放在桌子上，立即分别放入盛有3%～5%来苏儿或5%石炭酸或0.25%新洁而灭溶液的玻璃缸（筒）内消毒24h 后，再经0.1MPa灭菌20min后，取出冲洗。
（3）带菌载玻片及盖玻片，使用后不得放在桌子上，立即放入盛有3%～5%来苏儿或5%石炭酸或0.25%新洁而灭溶液的玻璃缸（筒）内消毒24h后，用夹子取出经清水冲干净。
如用于细菌染色的载玻片，要放入50g/L肥皂水中煮沸10min，然后用肥皂水洗，再用清水洗干净。
最后将载玻片浸入95%酒精中片刻，取出用软布擦干，或晾干，保存备用。
若用皂液不能洗净的器皿，可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。
（4）含油脂带菌器材的清洗
单独高压灭菌：用0.1MPa灭菌20～30min→趁热倒去污物→倒放在铺有吸水纸的篮子上→用100℃烘烤0.5h→用5%的碳酸氢钠水煮两次→再用肥皂水刷洗干净。
（二）玻璃器材的晾干或烘干
1.不急用的玻璃器材：可放在实验室中自然晾干。
2.急用的玻璃器材：把器材放在托盘中（大件的器材可直接放入烘箱中），再放入烘箱内，用80℃～120℃烘干，当温度下降到60℃以下再打开取出器材使用。
（三）灭菌前玻璃器皿的包扎
1.培养皿的包扎
培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
2.移液管的包扎
在移液管的上端塞入一小段棉花（勿用脱脂棉），它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口0.5cm左右，棉花自身长度1～1.5cm。塞棉花时，可用一外围拉直的曲别针，将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。
先将报纸裁成宽5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45°角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，右手将移液管压紧，在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。
3.试管和三角瓶棉塞
试管和三角瓶都需要做合适的棉塞，棉塞可起过滤作用，避免空气中的微生物进入容器。制作棉塞时，要求棉花紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，松紧适宜。过紧易挤破管口和不易塞入，过松易掉落和污染。棉塞的长度不小于管口直径的2倍，约2/3塞进管口。
目前，国内已开始采用塑料试管塞，可根据所用的试管的规格和试验要求来选择和采用合适的塑料试管塞。
若干支试管用绳扎在一起，在棉花部分外包裹油纸或牛皮纸，再用绳扎紧。三角瓶加棉塞后单个用油纸包扎。
（1）试管棉塞的制作
制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的团孔上，用右手食指将棉花从中央压入团孔中制成棉塞，然后直接压入试管或三角瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折叠卷塞法制作棉塞。
制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿缝隙侵入，棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，试管不下落为准。棉塞的2/3在试管内，1/3在试管外。
具体是否正确。目前也有采用硅胶塞代替棉塞直接盖在试管口上。
将装好培养基并塞好棉塞或硅胶塞的试管捆成一捆，外面包上一层牛皮纸。
用记号笔注明培养基名称及配制日期，灭菌待用。
（２）三角瓶棉塞制作
通常在棉塞外包上一层纱布，再塞在瓶口上。有时为了进行液体振荡培养加大通气量，则可用8层纱布代替棉塞包在瓶口上，目前也采用硅胶塞直接盖在瓶口上。
在装好培养基并塞好棉塞或包扎8层纱布或盖好硅胶塞的三角瓶口上，再包上一层牛皮纸并用线绳捆好，灭菌待用。
【思考题】
1.玻璃器皿清洗的注意事项有哪些？
2.请简述有菌玻璃器皿清洗的一般步骤。
