全血、血清、血浆样品可用于HIV抗体检测。
（四）操作步骤
1．采样前准备。根据检测项目的具体要求，确定采集样品的种类、处理、保存及运输的时限和方法，按照临床采血技术规范的要求操作，遵守生物安全要求（参见本规范第八章实验室生物安全）。
要检查所需物品是否已备齐，是否在有效期内，有无破损，是否足量，特别应检查受检者信息与样品容器表面的标记是否一致，并注明样品采集时间。选择合适的室内（外）采血空间，受检者坐（卧）于合适的位置，准备采血用具、皮肤消毒用品、采血管及试管架、硬质废弃物容器等。
①样品的编码和记录。应制定样品编码的标准操作程序（SOP），规定样品编码的原则和方法，为样品制定唯一性编码（编号），保证其唯一性。
②采血前，先对装有样品的离心管或滤纸进行标记，核对后编码。要将标签贴在试管的侧面，最好使用预先印制好的、专门用于冷冻储存的耐低温标签。
③应使用专门的样品记录本或登记表记录样品，同时录入电脑保存。
2．采集和处理样品。
①血液。a.抗凝全血：消毒局部皮肤，用加有抗凝剂（EDTA钠盐或钾盐、枸橼酸钠、肝素钠）的真空采血管抽取适量静脉血，或用一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管中，轻轻颠倒混匀6～8次，备用。b.末梢全血：消毒局部皮肤（成人和1岁以上儿童可选择耳垂、中指、无名指或食指。1岁以下儿童采用足跟部）。用采血针刺破皮肤，用无菌纱布擦掉第一滴血。收集滴出的血液，备用。c.血浆：将采集的抗凝全血1500～3000r/min离心15min，上层即为血浆，吸出置于合适的容器中，备用。d.血清：根据需要，用一次性注射器（或真空采血管）抽取5～10ml静脉血，室温下自然放置1～2h，待血液凝固、血块收缩后再用1500～3000r/min离心15min，吸出血清，置于合适的容器中，备用。
3．样品的保存。
①用于抗体和抗原检测的血清或血浆样品，短期（1周）内进行检测的可存放于2～8℃，一周以上应存放于-20℃以下。
②艾滋病检测筛查实验室检测的筛查阳性样品应及时送确证实验室，筛查阴性样品，可根据具体需要决定保存时间，建议至少保存1～2个月。特殊用途或专项项目的样品根据具体要求确定保存时间。
③艾滋病检测确证实验室收到的筛查阳性样品，无论确证结果如何，均应将剩余的样品保存至少10年，特殊用途或专项项目的样品根据具体要求确定保存时间。
4．样品的运送。
①应符合生物安全要求；要获得相关部门批准并由具有资质的人员专程护送。
②应采用三层容器对样品进行包装，随样品应附有与样品唯一性编码相对应的送检单。
送检单应标明受检者姓名、样品种类等信息，并应放置在第二层和第三层容器之间。a.第一层容器：直接装样品，应防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的唯一性编码或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。b.第二层容器：容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。
要求不易破碎、带盖、防渗漏、容器的材料要易于消毒处理。c.第三层容器：容纳并保护第二层容器的运输用外层包装箱。外面要贴上醒目的标签，注明数量、收样和发件人及联系方式，同时要注明“小心轻放、防止日晒、小心水浸、防止重压”等字样，还应易于消毒。d.用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运送。e.运送样品必须有记录。f.特殊情况下经有关部门批准可以用特快专递邮寄样品，但必须按三层包装，将样品管包扎好，严禁使用玻璃容器。
5．样品的接收。
①样品包裹必须在具有处理感染性材料能力的实验室内，由经过培训的、穿戴防护衣、戴口罩、防护眼镜的工作人员在生物安全柜中打开，用后的包裹应及时进行消毒。
②核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报告实验室负责人和上一级实验室技术人员。
③检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。
如果污染过重或者认为样品不能被接受，应将样品安全废弃。并将样品情况立即通知送样人。
④接收样品时应填写样品接收单。
二、HIV抗体检测
（一）范围
本章规定了HIV抗体的检测方法、程序、结果报告、检测策略及质量控制。适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者诊断和监测的实验室依据。
（二）规范性引用文件
《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》（中华人民共和国卫生行业标准，WS293-2008）GuidanceforHIVtestingintheWesternPacificRegion.WHODraft19,July,2008．StatementfromtheSurveillanceandSurveyWorkingGroupandtheLaboratoryWorkingGrouptotheOfficeoftheGlobalAIDSCoordinator.26Nov.2006．GuidelinesfortheuseoftheBEDassayforincidenceestimationandsurveillanceinresourcelimitedcountries.Atlanta,5June,2006．RevisedGuidelinesforHIVCounseling,Testing,andReferral.U.S.CDC,2001．CurrentHIV-2diagnosticstrategyoverestimatesHIV-2prevalenceinChina.JournalofMedicalVirology,2009,81:790-797．（三）HIV抗体检测实验室要求应符合《全国艾滋病检测工作管理办法（2006）》中对实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。
实验室的质量保证和实验室安全防护按本规范相关章节规定执行。
（四）HIV抗体检测的目的和要点
1．HIV抗体检测的目的。
（1）HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。
（2）以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。
（3）以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。
（4）以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。
2．HIV抗体检测的要点。
（1）根据目的选择检测方法及检测策略。
（2）严格遵守实验室SOP。
（3）筛查试验阳性，须作确证试验。
（4）筛查试验阴性，不应做确证试验。
（5）筛查及确证试验阳性均应做好咨询工作。
（五）以诊断为目的的检测策略
1．常规HIV抗体检测的方法和程序。HIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检）和确证试验。
（1）筛查试验。
①筛查试剂。必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂，其中酶联免疫试剂应批批检合格。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。
②筛查样品。HIV抗体筛查可采用血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液样品。
③筛查方法。a.酶联免疫吸附试验（ELISA）。可使用血液、唾液、尿液样品，ELISA多为单纯HIV抗体检测试剂。HIV抗原抗体联合检测试剂可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶标记的HIV抗原或抗体，加底物显色，用酶标仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。b.化学发光或免疫荧光试验。这类试剂采用发光或荧光底物，既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。c.快速检测（RT）及其他检测试验。这类试验简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测。一般可在10～30min内得出结果。
明胶颗粒凝集试验（PA）：是HIV血清抗体检测的一种简便方法。将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用。当待检样品含有HIV抗体时，明胶颗粒与抗体发生凝集反应，根据凝集情况判读结果。PA试剂有两种:同时检测HIV-1和HIV-2抗体以及分别检测HIV-1和HIV-2抗体。有效试验必须有阴性和阳性质控。
免疫渗滤试验：斑点ELISA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验：均以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点状固定在膜上，加待检样品。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10min以内。有效试验的质控点必须显色。
免疫层析试验：以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原线状固定在膜上，待检样品（血液或唾液）沿着固相载体迁移，阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带。有效试验的质控带必须显色。
（4）筛查程序。
①初筛试验。根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛检测，对呈阴性反应的样品，可出具HIV抗体阴性（-）报告；对呈阳性反应的样品，需要进一步做复检试验和确证试验。
②复检试验。对初筛呈阳性反应的样品，应使用原有试剂和另外一种不同原理（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行复检试验。如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。如两种试剂复检均呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性（-）；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确证实验室进行确证试验（图9-1）。如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反应，而抗体试剂检测为阴性反应，则应考虑进行HIV-1p24抗原或核酸检测，必要时进行随访。
艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反应的样品，确证实验室可以直接进行确证试验。
③初筛和复检流程见图9-1。
④筛查试验结果的报告。HIV抗体筛查试验用附表1进行报告，阴性反应报告为“HIV抗体阴性（-）”；阳性反应报告为“HIV抗体待复检”。
（5）筛查试验呈阳性反应样品的转送。如需送上级实验室进行复检，需要核对身份，补充个人信息（如姓名和身份证号码），必要时采集第二份血样，持HIV抗体筛查报告，送当地艾滋病筛查中心实验室，或直接送确证实验室复检。HIV抗体复检试验用附表专用表格2进行报告，两次检测均阳性或一阴一阳报告为“HIV抗体待确证”；两次检测均阴性报告为“HIV抗体阴性（-）”。HIV抗体复检报告需由1名检验人员和1名审核人员签字。
①先用第一种筛查试剂（高敏感性）检测，出现阴性反应报告HIV抗体阴性；出现阳性反应则报告“HIV抗体待复检”，用第二种筛查试剂复检。
②第二种筛查试剂（高特异性）复检，出现阴性反应进行确证试验；出现阳性反应用第三种筛查试剂进行确证。
③第三种筛查试剂（高特异性ELISA）检测结果阴性，则报告HIV抗体阴性；检测结果阳性，且S/CO比值大于或等于6.0者，可以出具“HIV-1抗体阳性（+）”报告，使用“HIV抗体替代策略检测报告单”（附表4）。ELISA试剂检测结果阴性或S/CO在1.0～5.9，须进行确证试验。按照确证试验结果报告。
（6）以监测为目的的检测策略。
①适用范围。全国艾滋病疫情监测。
②检测程序及结果报告（见图9-3）。a.先用第一种筛查试剂（高敏感性ELISA）检测，出现阴性反应报告“HIV抗体阴性（-）”。出现阳性反应则用另一种不同原理或不同厂家的筛查试剂（高特异性ELISA）复检。b.初筛和复检均为阳性，且样品OD值与临界值（Cutoff）的比值（S/CO）均≥6.0者可作阳性考虑，上报疫情；初筛与复检任何一种试剂检测结果S/CO比值在1.0～5.9，或复检结果出现阴性反应，应进一步作确证试验，按照确证试验的标准判断结果（见图9-3）。
c.发放检测报告的同时上报疫情。d.对报告阳性者做好检测后咨询。e.本程序仅用于流行病学监测和无关联检测，结果不得报告给个人。
（7）以血液筛查为目的的检测策略。参照血液系统相关规定执行。
（8）艾滋病检测实验室检测信息上报。各级艾滋病检测实验室所在机构每月应填写《HIV抗体检测数及阳性人数统计报表》，并于每月10日前完成网络直报。未开展网络直报的单位，由县级疾病预防控制机构收集信息后统一上报。
三、实验室生物安全
（一）范围
本章规定了艾滋病实验室安全防护和职业暴露预防。适用于全国各级各类艾滋病实验室的安全防护和职业暴露预防。
（二）规范性引用文件
《医务人员艾滋病病毒职业暴露防护工作指导原则（试行）》中华人民共和国卫生部，2004年5月31日颁布，2004年6月1日起实施。
《实验室生物安全通用要求》GB19489-2008，2009年7月1日起实施。
《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS233-2002）》中华人民共和国卫生行业标准，2002-12-03发布，2003-08-01实施。
GuidelinesfortheSafeTransportofInfectiousSubstancesandDiagnosticSpecimens.WHO,1997．《消毒技术规范（2002年版）》中华人民共和国卫生部2002-11-15发布，2003-04-01起实施。
（三）HIV的生物危害
第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。人类免疫缺陷病毒（HIV）属第二类病原微生物，是高致病性病原微生物。
（四）HIV相关检测的生物安全级别
1．HIV抗体检测（包括筛查和确证实验）、抗原检测和相关的免疫学检测应在符合Ⅱ级生物安全实验室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。
2．HIV分离培养、浓缩、中和试验、细胞培养及研究工作及其他需要应用活病毒的研究工作，应在Ⅲ级生物安全实验室（BSL-3）中进行。
3．HIV核酸提取和检测均应在符合Ⅱ级生物安全实验室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。
